人間充質干細胞培養(yǎng)基已經(jīng)發(fā)展到了第三代

*代 培養(yǎng)基+牛血清

第二代 培養(yǎng)基+牛血清替代品：人血清、血小板裂解液和臍帶血清

第三代 無血清、無動物源、成分確定的培養(yǎng)基

第三代人間充質干細胞培養(yǎng)基不含牛血清或人血清之類的血清替代品，無動物源而且成分確定，免除了異種血清帶來的病原體污染風險，批次穩(wěn)定，適合干細胞治療的臨床研究。

HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基

中文名：HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基

英文名：HY STEMCELL CCGmHuM^TM  Human MSCs Growth Medium

HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基是成分確定、無血清、無異源物，無需鋪板膠的*培養(yǎng)基。適用臍帶或脂肪來源的人間充質干細胞的原代培養(yǎng)擴增。培養(yǎng)的hMSC可傳多代。

特點

Serum-free 無血清成分

Xeno-free 無異種蛋白

Chemically-defined 化學成分明確

NO plate coating necessary 無須昂貴的鋪板蛋白

Perform better than FBS medium 生長分化優(yōu)于血清培養(yǎng)基

組份

HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基包括【Basal Medium 基礎培養(yǎng)基】 和 【Supplement Medium 細胞因子添加物】兩部分?；A培養(yǎng)基中添加HEPES和L-谷氨酰胺。細胞因子添加物中含有多種細胞生長因子、粘附蛋白、轉鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。

培養(yǎng)表現(xiàn)

使用HY StemCell CCGmHuM^TM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)人臍帶間充質干細胞，傳到第7代，MSC形態(tài)功能維持良好。

應用

適用于原代培養(yǎng)臍帶或脂肪組織來源的人間充質干細胞。

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：*培養(yǎng)基

細胞系：臍帶或脂肪組織來源的人間充質干細胞

細胞類型：貼壁

儲存

基礎培養(yǎng)基保存在2～8℃。細胞因子添加物保存在–20°C。

使用注意

為保障活性，建議把【Supplement Medium 細胞因子添加物】一次解凍后分裝再凍存，不宜反復凍融。

訂購信息

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背景知識

一 人間充質干細胞培養(yǎng)基的發(fā)展

人間充質干細胞的來源

從1970年發(fā)現(xiàn)以來，脂肪組織、胎盤、牙髓、滑膜、外周血、牙周韌帶、子宮內(nèi)膜、臍帶和臍帶血中都有研究發(fā)現(xiàn)間充質干細胞[1]，不過應用比較多的來源還是骨髓、脂肪和臍帶組織中的間充質干細胞[2]。目前，異體間充質干細胞密度zui高來源是臍帶，每毫升zui高能獲得470萬個MSC，而自體間充質干細胞密度zui高來源是脂肪組織，每毫升zui高能獲得155萬個MSC[3]。HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基就是適用臍帶和脂肪組織來源的hMSC培養(yǎng)。

人間充質干細胞的培養(yǎng)發(fā)展[4]

人間充質干細胞的下游應用是組織修復等疾病治療，因此它的培養(yǎng)要滿足醫(yī)用的高標準。隨著臨床應用的成熟，間充質干細胞培養(yǎng)基也經(jīng)歷了從有血清到無血清培養(yǎng)基的轉變。

有血清培養(yǎng)基一開始使用的是胎牛血清，胎牛血清是天然產(chǎn)品，批次間差異大，影響實驗穩(wěn)定性，尤其還是異源物，會有病原體污染風險和免疫影響，不利治療安全，需要額外監(jiān)管。于是越來越多的血清培養(yǎng)基選擇了自體或同源異體的人源血清作為培養(yǎng)基添加物，包括人血清、血小板裂解液和臍帶血清。

低血清或人源血清仍然不夠穩(wěn)定，也不能*免除病原體的污染風險，隨之興起的是成分確定的無血清培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基用重組人蛋白代替血清中的天然蛋白，以此來消滅異種蛋白輸入人體可能會引起的免疫抗體反應。比如血清中zui基礎的白蛋白、轉鐵蛋白和胰島素，無血清培養(yǎng)基都改用重組人轉鐵蛋白和重組人胰島素代替，而不是提取天然產(chǎn)物。無血清培養(yǎng)基發(fā)展中，確定了多種生長因子是人間充質干細胞擴增必須添加的。HY STEMCELL CCGmHuM^TM 人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基細胞因子添加物中含有多種細胞生長因子、粘附蛋白、轉鐵蛋白、胰島素、微量元素和人白蛋白等成分。

二 人類間充質干細胞的分離與原代培養(yǎng)方法[5]

新生兒臍帶間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)

新生兒臍帶組織剝?nèi)∪A通氏膠，以組織塊培養(yǎng)法或酶消化法分離新生兒間充質干細胞，

貼壁法做原代培養(yǎng)。

新生兒臍帶血來源間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)

新生兒臍帶血樣本，與磷酸緩沖液 1:1 稀釋后，以密度梯度離心法分離單個核細胞，貼

壁法培養(yǎng)。定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長的成纖維細胞樣的細胞達到匯合。

新生兒胎盤間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)

剝?nèi)√ケP羊膜、絨毛膜或絨毛組織，以酶消化法分離胎盤間充質干細胞，貼壁法做原代

培養(yǎng)。

人類脂肪間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)

成人脂肪組織，以酶消化法分離脂肪間充質干細胞，貼壁法做原代培養(yǎng)。

人類牙髓間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)

牙齒樣本，完整剝離牙髓，以酶消化法分離牙髓間充質干細胞，貼壁法做原代培養(yǎng)。

人類骨髓間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)

人骨髓液樣本，以密度梯度離心法分離骨髓間充質干細胞，貼壁法作原代培養(yǎng)。

人類宮內(nèi)膜間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)

宮內(nèi)膜組織樣本以酶消化法分離子宮內(nèi)膜干細胞，并做原代培養(yǎng)?；?/span>

人羊水來源間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)

人羊水樣本，100 目濾器過濾后離心，棄上清。以培養(yǎng)液重懸細胞沉淀，貼壁法培養(yǎng)。

定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長的成纖維細胞樣的細胞達到匯合。

人類母乳來源間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)

人類母乳樣本，100 目濾器過濾后離心，棄上清。以培養(yǎng)液重懸細胞沉淀，貼壁法培養(yǎng)。

定期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長的成纖維細胞樣的細胞達到匯合。

人類滑膜來源間充質干細胞分離與原代培養(yǎng)

人類滑膜組織樣本，以酶消化法分離滑膜間充質干細胞。離心洗滌后，貼壁法培養(yǎng)。定

期更換培養(yǎng)基直到貼壁生長的成纖維細胞樣的細胞達到匯合。

三 人臍帶間充質干細胞[6]

圖源網(wǎng)絡：臍帶和華通氏膠

人臍帶內(nèi)、臍血管周圍含有豐富的基質即華通膠，膠內(nèi)含有大量間充質干細胞——人臍帶華通膠間充質干細胞（human umbilical cord Wharton′s jellyderived mesenchymal stem cells，hWJ-MSC），該干細 胞能夠穩(wěn)定表達間充質干細胞*的分子標記物。 近幾年，hWJ-MSC 已成為干細胞治療領域理想的種 子細胞。其高表達 CＤ54、CＤ146 等生長因子，提示其具有高度增殖分化潛能，同時 hWJ-MSC 通過分泌相關因子或者通過細胞與細胞間直接接觸調節(jié)單核 細胞、巨噬細胞等免疫細胞的免疫功能?；?hWJMSC 取材方便、來源廣泛、增殖分化潛能高、免疫原性低等特點，hWJ-MSC 的相關研究已經(jīng)從zui初的體 外細胞實驗發(fā)展到體內(nèi)動物實驗，更有學者已經(jīng)將 hWJ-MSC 應用到了臨床實驗中。

參考文獻

1 FENG-JUAN LV et al.Concise Review: The Surface Markers and Identity of Human Mesenchymal Stem Cells.2014.

2 Marcin Majka et al.Concise Review: Mesenchymal Stem Cells in Cardiovascular Regeneration: Emerging Research Directions and Clinical Applications.2017.

3 C. ThomasVangsness Jr. et al.Umbilical Cord Tissue Offers the Greatest Number of Harvestable Mesenchymal Stem Cells for Research and Clinical Application: A Literature Review of Different Harvest Sites.2015.

4 Dolly Mushahary et al.Isolation, C*tion, and Characterization of Human Mesenchymal Stem Cells.2017.

5 SZDB/Z 126 2015《人類間充質干細胞庫建設與管理規(guī)范》

6 何蓓 等.人臍帶華通膠間充質干細胞的生物學特性及研究新進展.2016.

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