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          LONZA支原體檢測(cè)試劑盒的操作步驟說(shuō)明

          更新時(shí)間:2017-11-06瀏覽:4400次

             LONZA支原體檢測(cè)試劑盒操作步驟:

            貼壁細(xì)胞:

            1.被檢細(xì)胞接種于無(wú)菌的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,接種密度為1-2×104。同時(shí),接種正常

            無(wú)支原體感染的同種細(xì)胞,作為陰性對(duì)照。

            2.5天后,先吸去培養(yǎng)液,再加入1ml的固定液,靜置20min,

            3.吸去固定液,晾干。

            4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部

            被檢細(xì)胞),37℃避光放置15-20min或室溫靜置20~30min。

            5.吸去Hoechst 33258工作液,加入2ml滅菌超純水洗滌三次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加

            入一滴封片液,并以蓋玻片覆蓋。

            6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀

            熒光小點(diǎn)。

            懸浮細(xì)胞:

            1.收集需檢測(cè)的細(xì)胞,1500rpm,5min。

            2.將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上,再加1ml的固定液,靜置20min。

            3.吸去固定液,晾干。

            4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部

            被檢細(xì)胞),37℃避光放置15~20min或室溫靜置20~30min。

            5.吸去Hoechst 33258工作液,用無(wú)菌水洗滌玻片3次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴

            封固液,并以蓋玻片覆蓋。

            6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀

            熒光小點(diǎn)。

            結(jié)果判斷(參考):

            陰性:僅見(jiàn)細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。

            陽(yáng)性:除細(xì)胞外,細(xì)胞周圍可見(jiàn)大量的大小均一的熒光著色顆粒。